兽药名称

通用名称:猪瘟病毒(CSFV-AB) ELISA抗体检测试剂盒商品名称:无

英文名称: Classical Swine Fever Virus (CSFV) Ab ELISAKit

汉语拼音: Zhuwenbingdu ELISA Kangti Jianceshjjhe

作用与用途

猪瘟是-种由猪瘟病毒引起的感染猪的高传染性疾病, -经发现必须向国际兽医局(OIE)报告。该病一旦暴发会给生猪养殖国家带来严重的经济损失。

猪瘟病毒(CSFV) ELISA抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的E2抗体。酶标板包被猪瘟病毒E2抗原(gp55蛋白) ,如果待检样品中含有猪瘟抗体,其与包被抗原结合后，将阻断HRP酶标记的E2单克隆抗体与包被抗原的结合,从而减少显色反应。本试剂盒为检测猪瘟抗体提供了一种快速、简便、准确的方法,并且适用于大规模的样本筛查。

主要组份与含量。
猪瘟病毒E2抗原包被板：2块板、5块板
样品稀释液：30mLX1、60mLX1
10倍洗涤液：125mLX1、240mLX1
CSFV E2 HRP标记抗体：30mLX1、70mLX1
TMB底物液：30mLX1、70mLX1
终止液.：20mLX1、40mLX1
阳性对照血清：1.5mLX1、3mLX1
阴性对照血清：1.5mLX1、3mLX1.
封板膜：2张、5张
说明书：1份
注意事项
1)储存条件为2-8*C。试剂盒开启前应确认其批号及有效期。

2)过期产 品请勿使用,不同批号的试剂盒组份禁止混用。
3)试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温(25±3°C),使用后放置2-8*C保存。
4)应注意避免向试剂盒中引入污染。
5)实验所用仪器 (如:微量移液器，恒温培养箱, ELISA洗板机，酶标仪)需要在使用前进行功能检查,确保其可用性、准确性。
6)所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按国家规定进行无害化处理。

7)移液器吸头必须一次一换。

8)未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。

9)试剂盒中各组份容器只针对该组份使用, 不可二次利用。

10)仅供兽医诊断使用。

用法与判定

1.试剂准备

1）所有试剂恢复至室温(25±3°C)后使用。

2) 1倍洗涤液的配制10倍洗涤液用超纯水进行10倍稀释,稀释后的洗涤液在2-8*C可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需10mL10倍洗涤液加90mL超纯水(dH:0)。

2.样品准备

1尽量使用新鲜采集的血清样品。

2)不能用于检测严重污染或严重溶血的样品。

3)如果血清样 本浑浊,需离心后取上清进行检测。

4)检测样品可在2-8℃保存5天, 长时间保存需要转移至-20°C或更低温环境中。

3.样品稀释及阴、阳性对照血清稀释

样品采用2倍稀释。按照下一页“微孔板加样位置示例图"在稀释板中加入70μL样品稀释液,各孔加入70μl血清样品。同样比例稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC) ,即:在稀释板A1、B1、C1、D1孔各加入70uL样品稀释液，A1、B1孔各加入70uL NC, C1、D1孔各加入70μL PC,充分混匀。

4.操作步骤

1) 将所有组份从试剂盒中取出,在恒温箱(25土3°C)中放置至少60分钟,恢复至室温。

2)按照 “微孔板加样位置示例图”向抗原包被板指定孔中分别加入100μL稀释后的样品以及100μL稀释后阴性对照血清(NC)、阳性对照血清(PC)。

3)盖上封板膜,室温(25±3°C)下孵育1小时(±2分钟)4)用ELISA洗板机或微量移液器洗板， 弃去孔中液体,每孔加300μL 1倍洗涤液, 洗涤3次。最后- -次洗涤后将酶标板在吸水纸_上轻轻拍干,严禁各步骤之间孔板出现干燥情况。

5)每孔加入100uL CSPV E2 HRP标记抗体。

6)盖上封板膜, 室温(25±3°C)下孵育30分钟(±1分钟)。

7)重复步骤4)。

8)每孔中加入100μL TMB底物液。

9)盖上封板膜, 室温(25±3°C)下孵育15分钟(±1分钟)。10)每孔中加入50uL终止液，终止酶促反应。

11)使用450nm波 长测量吸光度值。

12)结果判定与计算。

5.判定
1) 实验成立条件
阴性对照0D450mm平均值>07; .
阳性对照PI平均值> 50%;
如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。

2) 计算方法
NC OD均值=(NC1+NC2)/2
3) PI值计算公式
PI (阻断百分率)= ((NC OD均值-样品OD值）/NC 0D均值)X 100%
4)判定标准
阳性：PI≥40%
阴性：Pl<409%：