兽药名称
通用名称:猪乙型脑炎病毒(JEV)ELISA抗体检测试剂盒 商品名称:无
英文名称:Swine Japanese Encephalitis Virus(JEV)Ab ELISA kit
汉语拼音:Zhu Yixingnaoyan Bingdu ELISA kangti Jiance
作用与用途
日本乙型脑炎病毒(JEV)为黄病毒科黄病毒属成员,是一 种可通过库蚊传播、造成人畜共患的病毒,其感染人可引起脑 炎,感染猪只会造成生殖系统疾病,如流产、死胎等。在流行该 病的地区,该病毒在自然界中主要在蚊虫、家禽、野鸟、猪和人 类中循环传播。猪是该病毒最主要的增殖宿主和传染源。本试 剂盒可用于监测猪血清中的JEV特异性抗体,其检测结果可作 为评价病毒感染或者疫苗免疫水平的依据。
主要组份与含量
猪乙型脑炎病毒抗原包被板 |
2块板 |
5块板 |
样品稀释液 |
60mL×1 |
180mL×1 |
10倍洗涤液 |
125mL×1 |
240mL×1 |
JEV HRP标记抗体 |
30mL×1 |
70mL×1 |
TMB底物液 |
30mL×1 |
70mL×1 |
终止液 |
20mL×1 |
40mL×1 |
阳性对照血清 |
3mL×1 |
7mL×1 |
阴性对照血清 |
3mL×1 |
7mL×1 |
封板膜 |
2张 |
5张 |
说明书 |
1份 |
1份 |
注意事项
1) 试剂盒储存条件为2-8℃。开启前应确认其批号及有效期。
2) 过期产品请勿使用,不同批号的试剂盒组份禁止混用。
3) 试剂盒使用前各组份试剂均需恢复至室温(25±3℃),使用 后放置2-8℃保存。
4) 应注意避免向试剂盒中引入污染。
5) 实验所用仪器(如:微量移液器,恒温培养箱,ELISA洗板机, 酶标仪)需要在使用前进行功能检查,确保其可用性、准确 性。
6) 所有试剂严禁接触皮肤和粘膜。检测结束后所用耗材需按 国家规定进行无害化处理。
7) 移液器吸头必须一次一换。
8) 未用的微孔板条可装入密封袋中2-8℃保存。
9) 试剂盒中各组份容器只针对该组份使用,不可二次利用。
10) 仅供兽医诊断使用。
用法与判定
1、试剂准备
1) 所有试剂恢复至室温(25±3℃)后使用。
2) 1倍洗涤液的配制
10倍洗涤液使用超纯水进行10倍稀释,稀释后的洗涤液 在2-8℃可以稳定保存1周。如配制100mL 1倍洗涤液需
10mL 10倍洗涤液加90mL超纯水(dH2O)。
2、样品标准
1) 尽量使用新鲜采集的血清样本。
2) 不能用于严重污染或严重溶血样本的检测。
3) 如果血清样本浑浊,需离心后取上清进行检测。
4) 检测样品可在2-8℃保存5天,长时间保存需要转移至 -20℃或更低温环境中。
3、样品稀释 样品采用2步法100倍稀释。第一步10倍稀释样品,稀释板中 每孔加入90μL样品稀释液,然后每孔加入10μL血清样品,充 分混匀;第二步再次10倍稀释,稀释板中每孔加入135μL样品 稀释液,然后每孔加入15μL第一步混匀后的样品,充分混匀。
禁止稀释阳性对照血清(PC)与阴性对照血清(NC)。
4、操作步骤
1) 将所有组份从试剂盒中取出,在恒温箱(25±3℃)中放 置至少60分钟,恢复至室温。
2) 向抗原包被板孔中加入100μL提前在稀释板中稀释后的 样品。
3) 向指定孔中分别加入100μL未稀释 的阴性对照血清 (NC)和阳性对照血清(PC)。
4) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育30分钟(±2分钟)。
5) 用ELISA洗板机或微量移液器洗板,弃去孔中液体,每孔 加300μL1倍洗涤液,洗涤三次。最后一次洗涤后将酶标 板在吸水纸上轻轻拍干,严禁各步骤之间孔板出现干燥 情况。
6) 每孔加入100μL JEV HRP标记抗体。
7) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育30分钟(±2分钟)。
8) 重复步骤5)。
9) 每孔中加入100μL TMB底物液。
10) 盖上封板膜,室温(25±3℃)下孵育15分钟(±1分钟)。
11) 每孔中加入50μL终止液,终止酶促反应。
12) 使用450nm波长测量吸光度值。
13) 结果判定与计算。
5、判定
1) 实验成立条件 阳性对照OD450nm平均值>0.4; 阴性对照OD450nm平均值<0.3;
如果检测结果不在界定范围则需要重新进行检测。 2) 计算方法
NC OD均值= |
NC1+NC2 |
|
2 |
|
PC OD均值= |
PC1+PC2 |
|
2 |
|
3) S/P值计算公式
S/P= 样品OD值-NC OD均值
PC OD均值-NC OD均值
4) 判定标准
阳性 阴性
S/P≥0.4 S/P<0.4
11) 每孔中加入50μL终止液,终止酶促反应。